结果

与测试化合物孵育后脂质CMC的变化。带负电荷的脂质diC8PS本质上是两亲性的，在水溶液中聚集并形成胶束，产生更亲脂的微环境。当Prodan与胶束相互作用时，其荧光发射发生了变化。从diC8PS的荧光浓度分布中观察到不连续性（图2），过渡脂质浓度为其CMC（CMCL=1.1毫克/毫升；L-脂质）。该CMC值与Vitovic在类似测试条件下使用表面张力方法测定的值相似。27当将测试化合物硫利扎定添加到基质中时，复合物（CMCDL；DL，药物脂质复合物）的CMC变为0.042 mg/mL(图2)。在样品中脂质浓度高于0.5 mg/mL时，荧光信号被淬灭，给出较低的值；但这并不影响CMC的确定。CMCDL和CMCL之间的比率被用来量化这种转变。

测定了45种商业化合物的药物脂质复合物的CMC值，并与在人类、动物或培养细胞中观察到的PLD进行比较（表1）。正如文献中所建议的那样，这些化合物分别分为四类。19,27 CMC偏移的程度由CMC比率(CMCDL/CMCL)表示（图3）。将来自人类、动物或培养细胞的PLD数据与使用这种荧光方法检测到的CMC偏移进行比较（图3）并使用CMC比率在

作为截止值0.75，大多数化合物在体内和体外数据之间表现出一致的排名，除了两个：华法林和氨氯地平。据报道，华法林20和氨氯地平10体内PLD较低或没有，但在该荧光测定中观察到CMC变化。

浓度依赖性。体内研究中PLD的程度是剂量依赖性的。24,33在体外试验中，浓度控制可用于估计剂量依赖性。一组七种报告的PLD诱导剂分别以三种不同的浓度进行了测试：910、91和9.1μM（图4）。对于氯喹和酮康唑，要么它们在10 mM时不能完全溶解在DMSO中，要么在使用10 mM DMSO储备液时与缓冲液混合后盐析出来，它们的最高浓度点被去除。所有化合物都表现出对CMC的浓度依赖性，以不同程度改变PLD诱导潜力。即使在910μM时，芬氟拉明似乎也是一种弱诱导剂，而硫利达嗪在不同浓度之间显示出显着变化。根据该体外数据，在9.1μM的最低浓度下，七种化合物中没有一种似乎能够诱导PLD。复合自聚合。与磷脂类似，大多数PLD诱导剂是两亲性的。尽管带有不同的电荷迹象，但它们也可以聚集并形成胶束。拉贝洛尔20,34和奎尼丁35被报道为PLD诱导剂；然而，在所应用的测试条件下，我们无法确定任何一种药物脂质复合物的CMC。获得的RFU值等于或低于空白（含荧光探针但不含脂质的化合物）中的值。进一步研究了不同药物浓度但没有脂质（0 mg/mL脂质），并且在无脂质测定缓冲液中，拉贝洛尔和奎宁的CMC值分别为26和20μM。这些CMC值远低于这些化合物在PLD筛选中的测试浓度，并且怀疑化合物的自聚集会干扰药物脂质复合物形成的检测，从而使CMCDL无法确定。

代谢物诱导的PLD。为了研究代谢对PLD的影响，选择了10种具有主要代谢事件的化合物，并使用报告的测定筛选了它们的主要代谢物，表现出不同的行为（图5和表2）。去乙基胺碘酮是胺碘酮的主要代谢物，其脂质结合能力比其母体高近10倍。对于氯喹、氯氮平和米安色林，它们的代谢物属于PLD非诱导剂组，与作为诱导剂的母体化合物相矛盾。由于溶解度限制，8-羟基米安色林和去甲基氯氮平的测试浓度为0.091 mM，低于其母体化合物的浓度(1 mM)。

表1

与它们的母体化合物相比，其他代谢物显示出相当的PLD诱导潜力，而其他代谢物则没有。

图3.在pH 7.2的荧光测定中观察到的CMC偏移（由药物脂质复合物(DL)的CMC和单独的脂质(L)的CMC之间的比率表示：CMCDL/CMCL）与体内人体内的比较体内动物或体外细胞PLD分析。CMCDL/CMCL的临界值为0.75，将PLD诱导剂（b，体内测定；[，细胞测定）与PLD非诱导剂(9)分开，只有两个异常值：氨氯地平和华法林。

图4.CMC移位（通过将药物-脂质复合物（DL的CMC之间的比率表示）和单独的脂质（L）的CMC：CMC测试化合物与二FF erent科幻最终在浓度样品孔在pH7.2。

测定pH影响。PLD中的脂质紊乱主要在构成酸性的溶酶体区室中观察到环境。为了模拟溶酶体条件，pH 4.8醋酸盐在PLD筛选研究中使用缓冲液，25种进行研究使用上述相同的程序商业化合物（表1）对。大多数化合物在结果相似两种缓冲液中的；然而，胺碘酮、氯米帕明、米安色林和华法林给出了截然不同的数据，将前三种化合物从PLD诱导剂转移到非诱导剂，将华法林剂转移从非诱导到诱导剂，从pH 7.2到pH 4.8。

Delta-8使用新方法测试CMC，而不是表面张力测试法——摘要

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